中國醫藥發展基金會

出處：中國醫藥研究叢刊
出版年度：2000
期別：第廿一期 p. 64-p.71
作者：王繼峰 / 李峨
單位：北京中醫藥大學基礎醫學院 生化教研室主任、教授、博士/ 北京西苑醫院實習醫師

　　高脂血症(hyperliporoteinemia,HLP)是一種脂代謝疾病，是動脈粥樣硬化和脂肪肝的重要發病因素。本實驗運用現代科學方法提取大豆總黃酗並觀察了大豆總黃酮對高脂飼料引起的大鼠高脂血症的預防和治僚作用，為防治高脂血症提供科學的用藥依據。
　　方法 :
　　　高脂飼料(豬油，膽固醇、蔗糖等 )飼餵 Wister大鼠一d個月，同時分組灌胃 :諾衡(陽性對照藥)，大豆總黃酮提取物屯個月。處死動物後，取血及肝組織，分別測定血清 TG、TC、HDL、LDL 及 MDA 和肝組織TG、TC及MDA 。
　　結果 :
　　　高脂飼料餵一個月 導致大鼠明顯的高脂血症 :血清 TGL從 2.77+ 0.4增加到 4.29士0.2mmol/4，TC從 2.59+ 0.4增加到34.41+ 3.1mmol/1及肝組織 TG、TC明顯增高，同時血清及肝組織 MDA 顯著高於普通飼料組，表明高血脂伴有過氧化性損傷 。灌餵一個月大豆總黃酮組明顯降低大鼠血清 TG、TC，抑制率達 35.78+ 6.8%、43.78+ 3.2%;明顯降低肝組織中 TG，抑制率 83.33土7.5%;升高血清中 HDL，增長率為106.10士40.6%，以上均強於諾衡組 ;其降低 LDL 抑制率達32.20+ 7.6%，與諾衡組相當(33.5土 12.9%) ;明顯降低血清及肝組織MDA，抑制率分別為 65.26士4.1%、40.82士5.2%，均強於諾衡組 。
　　結論 :
　　　總黃酮能有效的抑制血脂的增高，減少肝內的甘油三脂堆積，調節脂質代謝紊亂，防治高脂血症的發生。
　　現代醫學研究表明，高脂血症(hyperliporoteinemia,HLP)是引發心腦血管疾病及脂肪肝的重要危險因素之一，只有採用科學、合理的策略，有效地控制血脂，才能預防相關疾病的發生。中醫藥治療高脂血症具有應用廣泛，療效確切，毒副作用小的優勢，因而受到患者好評和臨床醫學專家的重視。
　　古今中外的醫學書籍中將大豆列為能使人類長壽的首要食品。明代李時珍認為 "食服大豆今人長肌膚，益顏色、填骨髓，加氣力，補虛能食。”;能 "寬中益氣、和脾胃" 。(1)現代流行病學調查進一步提示經常食用大豆的人群具有較低的冠心病患病率和死亡率。動物實驗也表明，食用大豆提取物可以降低實驗性動脈粥樣硬化的發病率，並證實大豆黃酮是降低總膽固醇約有效物質。相反，除去黃酮類物質的純化大豆蛋白對膽固醇降低沒有作用。

　　對桓河猴飼餵不含總黃酮的大豆蛋自和大豆總黃酮提取物的對照實驗中，發現大豆總黃酮對血漿中低密度脂蛋自膽固醇 (LDH)亦有明顯的降低作用。這些實驗進一步證明大豆類總黃酮不僅調控脂蛋白的代謝，並在防治粥樣斑塊的形成和發展上亦百作用 。但也有文獻報導大豆總黃酮缺乏這種作用(2)。國內研究大豆總黃酮的工作剛剛開始，而發表的有關醫學實驗文章也不多見(3)。
　　我國大豆年產量 1380萬噸左右，占世界第三位，豆類及豆製品含有多種防癌、抗癌、預防和治療心血管疾病物質，其中包括大豆總黃酮、大豆皂、凝集素、蛋白醃抑制劑、纖維素、鈣、晒、植酸、葉酸等，利用豐富的大豆資源生產保健食品及藥物對提高我國人民身體健康素質有其現實意義和巨大的經濟效益。
　　本實驗運用現代科學方法，提取和研究大豆總黃酮的抗血脂升高作用，發現大豆總黃酮能有效的抑制血脂的增高，減少肝內的甘油三脂堆積，調節脂質代謝紊亂，降低脂質過氧化物的生成。其藥理作用與進口藥物諾衡相當，但價格低廉，為防治高脂血症提供了新的用藥依據。

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一、實驗材料
　　1、動物
　　　　Wister雄性大鼠，6-8週，體重150-180g隻，共6隻。由中醫研究院動物室提供 。
　　2、藥物
　　　　1.大豆提取物 :

　　　　　每毫升含總黃酮 5mg，北京中醫藥大學生物化學教研組製備;
　　　　2.陽性對照藥 :

　　　　　諾衡，美國派德藥廠生產，900mg/片 ;
　　　　3.膽酸鈉 :

　　　　　海電淀區微生物培養基製品廠生產 ;
　　　　4.丙基硫氧嘧啶 ;
　　　　5試劑及藥盒 :

　　　　　1.甘油三酯(TG )試劑盒，由北京化工廠臨床試劑分廠生產，編號:990319

　　　　　2.總膽固醇測定試劑盒(TC )，由北京化工廠臨床試劑分廠生產，編號:990408

　　　　　3.血清高密度脂蛋白試劑盒，北京化工廠臨床試劑分廠生產，編號:990522。

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二、實驗方法
　　1.製備高脂飼料:

　　　1%膽固醇，10%豬油，0.2%甲基硫氧嘧啶，0.5%膽酸，5%蔗糖，83.3%基礎飼料。各物混勻，加水攪拌，弄平切塊，放入烘 乾箱中烘乾，溫度100。C 左右。
　　2.動物分組：

　　　餵養與給藥:取大鼠60隻，隨機分為正常組，模型組，陽性藥諾衡組(各10隻)以及總黃酮組(30隻)正常組每日給予普通飼料餵養，其餘各組每日給予高脂飼料(20g/隻)，待全部吃完後再補給足量正常基礎飼料。陽性對照組每目每隻灌胃給諾衡16.76mg，治療組分大，中，小三個劑量組每日每隻分別給總黃酮2ml/100g體重，lml/100g體重和0.5ml/100g體重，以上均灌胃給藥，每日一次，一週六天。正常組，模型組均給予生理食鹽水，每日每隻2ml/100g體重。所有動物自由飲水，共飼養15或 30日。
　　3.標本採集:

　　　所有大鼠於取材前一天停高脂飼料，並禁食12小時。斷頭取血及肝臟，製備血清及肝勻漿，儲存於-20。C 備用。
　　4.觀察項目及測定方法：

　　　膽固醇(TC )、甘油三酯(TG )、高、低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C，HDL-C )，採用?法，用724型可見光分光光度計測定，試劑盒由北京化工廠臨床試劑分廠生產;肝組織中TC、TG的提取採用氯仿/正丁醇法，測定用?法:蛋白含量測定用酚試劑法;MDA用改良八木國夫法測丙二醛(malondiadehyde，MDA )。
　　5.統計學處理:採用檢驗 。

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三、結果
　　本實驗用高脂飼料飼餵大鼠造成高脂血症模型，進食高脂飼料後，高脂大鼠與正當組相比體重上升緩慢，但模型組與治療組體重並無明顯差異。高脂飼料飼餵後兩週，模型組TC已有明顯升高，但 TG增高無統計學意義，當飼餵時間增至四週，血清TG、TC兩項均高於正常，兩組數據比較有顯著意義(P<0.005)(表1)。故實驗時間定為四週。動物飼餵四週後，大豆總黃酮大、中劑量組大鼠血清TG、TC較模型組明顯降低差別有顯著意義(P<0.005)，陽性對照藥(諾衡)組大鼠血清TC也較模型組明顯降低(P < 0.05)，但對 TG作用不明顯。大豆總黃酮組與諾衡組比較，大、中劑量降低 TG作用強於陽性對照藥，降低 TC差別無統計學意義 (P < 0.05)。為進一步觀察肝組織中甘油三酯堆集，本實驗還測定了肝組織中的TG。結果顯示，大豆總黃酮中、小劑量組能明顯降低其水平，與模型組比較有顯著意義(P < 0.05)(表 2)。
　　大豆總黃酮大中劑量組能明顯升高血清高密度脂蛋白，與模型組數據比較有顯著意義(P < 0.05)，諾衡組及大豆總黃酮小劑量組升高高密度脂蛋白，但無統計學意義。模型組血清低密度脂蛋白較正常組有顯著增高，兩組數據比較有顯著意義 (P< 0.001)，諾衡組及大豆總黃酮大、中劑量組降低低密度脂蛋白有極顯著意義(P< 0.001)(表3)。血清 MDA測定數據顯示，諾衡組、大劑量組、中劑量組均能明顯降低MDA水平，與模型組比較均有顯著意義 (P < 0.005) ;肝組織 MDA測定數據顯示，諾衡組、大劑量組均能明顯降低MDA水平，與模型組比較均有顯著意義(P< 0.05) (表4)。
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四、討論
　　本研究結果顯示大豆提取物(總黃酮)有明顯的對抗實驗性高脂血症、脂肪在肝臟中蓄積的作用。
　　複製動物高脂血症模型是研究動脈粥樣硬化的疾病的重要方法。大鼠雖然對高脂飲食較耐受，但價廉，來源廣，取血方便，血量較小鼠多，有易飼餵 ;易灌胃，抵抗力強，食性與人相近。加入膽酸鹽和甲基硫氧嘧啶後，能形成滿意效果。因此用大鼠製造高血脂模型仍受到人們的重視，近來有文獻報導，如果高脂飼料加上VitD3，四週後，除血脂和膽固醇高於正常外，可見到大鼠主動脈內膜增厚，中膜平滑肌細胞增生，有些部位中層萄班顯鈣化斑，初步造成動脈粥樣硬化模型。
　　本實驗採用高脂飼料飼餵大鼠 2週後，血膽固醇明顯升高，但血甘油三酯升高不明顯。飼餵大鼠高脂飼料4週後，與正常大鼠相比，TC升高近16倍，TG升高約2倍，因此實驗時間定為4週 。
　　本實驗表明，大豆總黃酮對高脂血症大鼠有明顯的調節改善作用，可顯著降低大鼠血清TC、TG，抑制率分別為29.03土9.1%--40.34土8.6%。同時顯著降低大鼠血清 LDL-C，升高 HDL-C水平，降低肝組織中TG水平，以達到調節脂質代謝紊亂的作用。傳統上認為 HDL是冠心病的保護因素，具有抗動脈粥樣硬化作用。單獨升高 HDL水平可以降低冠心病發生率(4)。HDL具有調節體內組織膽固醇庫的作用，它能將週圍組織和動脈壁上的膽固醇吸收下來，能把它運輸到肝臟中代謝，從膽汁排出。因此HDL可防止脂質在動脈壁上沈積，防止脂肪在肝內堆積，具有抗動脈硬化和抗脂肪肝的作用。
　　生物膜中的不飽和脂肪酸(FFA )能與氧自由基發坐脂質過氧化反應，形成脂質過氧化物(如MDA等)以及新的氧自由基，引起細胞損傷及代謝障礙。肝臟是脂質及脂蛋白代謝的主要器官，肝細胞受損，脂質及脂蛋白代謝紊亂可引起血脂升高。肝組織MDA含量反映了肝組織脂質過氧化程度，間接反映了肝細胞損傷及代謝障礙的程度例。而血MDA含量反映了全身組織脂質過氧化程度，間接反應整體脂質代謝障礙的程度日。
　　本實驗表明，模型組大鼠肝組織及血中MDA含量上升，提示高脂血症模型確實存在脂質過氧化的發病機制。總黃酮組大鼠MDA含量下降提示總黃酮的抗氧化作用，拮抗脂質過氧化反應，從而保護了肝細胞的正常代謝功能。
　　本實驗的陽性對照藥諾衡為安妥明衍生物，是臨床上常用的藥物。本實驗表明，大豆總黃酮確有良好的降血脂作用，其降低 TC、TG、MDA，升高 HDL和降低 LDL作用均與諾衡相當。但諾衡有明顯的消化道反應等副作用和價值昂貴。
　　除具有降血脂和總膽固醇、抗氧化作用外，大豆總黃酮類，還可以抑制血小板活性和聚集，以及抑制血管內凝血，防止動脈粥樣硬化，延遲了心臟病和心源性休克的發作。此外，大豆總黃啊物質被認為具有雙向調節雌激素活性的作用，長期服用還可減少生殖系統腫瘤的發病率。因此，大豆總黃酮成為近年來國際上研究的熱點之一，其有效成分包括染料木素?元被證明有強烈的抑制癌細胞生長功能並正在逐步開發成新藥。這也是本實驗室正在進行的研究工作之一。

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